Урсгалын цитометр нь эсийг гүнзгийрүүлэн шинжлэхэд ашигладаг цитологийн судалгааны арга юм. Үүний давуу тал нь эс бүрийг тусад нь судлах боломжийг олгодог. Энэ төрлийн шинжилгээ нь хэдэн секундын дотор хэдэн зуун нүднүүдийн хэд хэдэн параметрийг үнэлэхэд тусалдаг. Үүний үр дүнд цитофлюориметрийг эрдэмтэд, эмч нарын одоо ашиглаж байгаа хамгийн хурдан бөгөөд үнэн зөв шинжилгээний аргуудын нэг гэж үздэг.
Зарчим
Урсгалын цитометрийн зарчим нь эсийн гэрлийн тархалт, гэрэлтэлтийг (флюресценц) хэмжихэд суурилдаг. Эсийн суспензийг цитометрийн эсээр өндөр хурдтайгаар урсгаж, лазераар цацрагаар дамжуулдаг. Гидродинамик гэж нэрлэгддэг фокусыг мөн тэнд гүйцэтгэдэг. Үүний механизм нь гаралтын хэсэгт судлагдсан тоосонцор бүхий эсээс гарах урсгал нь илүү өндөр хурдтай гадны тийрэлтэт онгоц руу урсдаг. Үүний үр дүнд бөөмс нь дараалсан гинжин хэлхээнд зэрэгцдэг.
Урьдчилсан эсүүд нь тусгай флюресцент будагч бодисоор (флюрохром) шошготой байдаг. Тэдний ачаар лазер туяахоёрдогч гэрэлтэлтийг өдөөдөг. Хүлээн авсан гэрлийн дохиог детекторууд бүртгэдэг. Дараа нь зарим шалгуураар ялгаатай эсийн популяцийг тоолох боломжийг олгодог програм хангамжийн алгоритмуудыг ашиглан мэдээллийг боловсруулдаг.
Ердийн микроскопоор хийсэн судалгаа нь ижил харагддаг тул өөр өөр эсүүдийг ялгаж чаддаггүй. Цитофлюориметр нь бусад өгөгдөл (ДНХ-ийн бүтцийн нэгдмэл байдал), уургийн илэрхийлэл, эсийн амьд үлдэх чадварыг шинжлэх боломжтой.
Флюрохромыг өдөөхөд янз бүрийн долгионы урттай гэрлийн цацраг, түүнчлэн янз бүрийн төрлийн детектор шаардлагатай байдаг тул орчин үеийн суурилуулалт нь хэд хэдэн илрүүлэх сувгаар (4-ээс 30 хүртэл) тоноглогдсон байдаг. Лазер ялгаруулагчийн тоо 1-ээс 7 хүртэл байж болно. Илүү нарийн төвөгтэй төхөөрөмжүүд нь бөөмийн хэд хэдэн шинж чанарыг нэгэн зэрэг олон параметрт судлах боломжийг олгодог.
Давуу болон сул тал
Урсгалын цитометрийн ашиг тус нь:
- боловсруулах өндөр хурд (1 секундэд 30 мянга хүртэлх үйл явдлыг бүртгэх);
- олон тооны эсийг судлах боломж (түүвэрт 100 сая хүртэл);
- Флюресцент гэрлийн эрчмийг тооцоолох;
- нүд бүрийн шинжилгээ;
- нэгдмэл бус үйл явцыг нэгэн зэрэг судлах;
- өгөгдлийг эсийн популяциар автоматаар тусгаарлах;
- үр дүнгийн чанартай дүрслэл.
Энэ технологийн өөр нэг онцлог ньШинжилсэн тоосонцорыг хэд хэдэн флюресцент уусмалаар будаж болно. Үүний ачаар олон параметрийн судалгаа гарч ирдэг.
Сул тал нь техникийн тоног төхөөрөмжийн нарийн төвөгтэй байдал, дээжийг тусгайлан бэлтгэх хэрэгцээ зэрэг орно.
Цитометр
Энэ төрлийн анхны төхөөрөмжүүд 1968 онд Германд гарч ирсэн боловч хожим нь өргөн тархсан. Одоогийн байдлаар урсгалын цитометрийн аргаар ажилладаг бүх төхөөрөмжийг 2 төрөлд хувааж болно:
- флюресцент цацраг (хоёр ба түүнээс дээш долгионы урт), 10° ба 90° гэрлийн тархалтыг хэмждэг төхөөрөмж (бага өнцөг ба хажуугийн тархалтыг илрүүлэгч);
- төхөөрөмжүүд нь үүрэн холбооны хэд хэдэн параметрийг хэмжихээс гадна эдгээр шалгуурын дагуу автоматаар бүлэгт ангилдаг.
Урагшаа тархах детектор нь эсийн хэмжээг тодорхойлоход зориулагдсан бөгөөд хажуугийн тархалтын төхөөрөмж нь эсийн доторх мөхлөг, цитоплазмын эзлэхүүний харьцаа, цөмийн талаарх мэдээллийг авах боломжийг олгодог.
Сонгодог цитометр нь гэрлийн микроскопоос ялгаатай нь эсийн дүрсийг авахыг зөвшөөрдөггүй. Гэсэн хэдий ч сүүлийн жилүүдэд микроскоп болон цитофлюориметрийн чадавхийг хослуулах чадвартай хосолсон төхөөрөмжүүдийг зохион бүтээжээ. Тэдгээрийг доор хэлэлцэх болно.
Зургийн цитометр
Сонгодог урсгалын цитометрт ашигладаг багаж хэрэгслийн хувьд,нэг онцлог шинж чанартай: хэрэв шинжлэгдсэн эсийн популяцид ховор тохиолдлууд бүртгэгдсэн бол тэдгээрийн мөн чанар нь юу болохыг үнэлэх арга байхгүй. Эдгээр хэсгүүд нь үхсэн эсийн үлдэгдэл эсвэл тэдгээрийн ховор бүлэг байж болно. Уламжлалт төхөөрөмжүүдэд ийм өгөгдлийг үйл явдлын ерөнхий урсгалаас хасдаг боловч тэдгээр нь шинжлэх ухаан, эмнэлзүйн шинжилгээнд онцгой ач холбогдолтой байж болох юм.
Шинэ үеийн дүрсний урсгалын цитометр нь мэдрэгчийн бүсээр дамжин урсаж буй эс бүрийн зургийг авах боломжийг танд олгоно. Компьютерийн дэлгэц дээр гарч буй диаграмын харгалзах хэсэг дээр дарснаар үүнийг харахад хялбар байдаг.
Хэрэглэх талбар
Урсгалын цитометр нь анагаах ухаан, шинжлэх ухааны олон салбарт хэрэглэгддэг бүх нийтийн арга юм:
- дархлаа судлал;
- онкологи;
- трансплантологи (улаан чөмөг, үүдэл эс шилжүүлэн суулгах);
- гематологи;
- хор судлал;
- биохими (эс доторх хүчиллэгийг хэмжих, бусад үзүүлэлтүүдийг судлах);
- фармакологи (шинэ эм бүтээх);
- микробиологи;
- паразитологи ба вирус судлал;
- далай судлал (усны биетийн төлөв байдал болон бусад ажлыг үнэлэхийн тулд фитопланктоны судалгаа);
- нанотехнологи ба бичил бөөмийн шинжилгээ.
Дархлаа судлал
Хүний дархлааны систем нь олон төрлийн эсүүдээс тогтдог. Дархлаа судлалын урсгалын цитометр нь тэдгээрийн бүтэц, үйл ажиллагааг үнэлэх, өөрөөр хэлбэл морфофункциональ үйл ажиллагааг явуулах боломжийг олгодог.шинжилгээ.
Ийм судалгаа нь дархлааны цогц шинж чанарыг ойлгоход тусалдаг. Эсийн фенотип нь эсрэгтөрөгчийн идэвхжил, эмгэгийн хөгжил болон бусад хүчин зүйлсийн үр дүнд өөрчлөгддөг. Цитофлюорометр нь дархлааны эсүүдийн дэд популяцийг цогц хольц болгон салгаж, тэдгээрийн бүх өөрчлөлтийг цаг хугацааны явцад үнэлэх боломжтой.
Хавдар судлал
Хавдар судлалын хамгийн чухал ажил бол эд эсийг төрлөөр нь ялгах явдал юм. Онкогематологийн урсгалын цитометрийн шинжилгээний зарчим нь дараахь үзэгдэл дээр суурилдаг: дээжийг тусгай флюресцент будгаар эмчлэхэд цитоплазмын уурагтай холбогддог. Идэвхтэй үрждэг эсүүдэд хуваагдсаны дараа түүний агууламж хоёр дахин буурдаг. Үүний дагуу эсийн гэрэлтэлтийн эрч хүч хоёр дахин буурдаг.
Үржих эсийг илрүүлэх өөр аргууд байдаг:
- ДНХ холбогч будагч бодис (пропидиум иодид) хэрэглэх;
- шошготой урацил хэрэглэх;
- эсийн мөчлөгийн зохицуулалтад оролцдог циклины уургийн илэрхийлэл нэмэгдсэн түвшинг бүртгэх.
